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  • 羊水细胞培养染色体检查

  • 发表时间:2016-04-07 21:32 | 来源:网络 | 点击数:
  • 关键词: 羊水 细胞 染色体
  •   羊水细胞培养染色体检查介绍:

      由于有害化学物质、X线照射、环境因素影响,高龄妊娠,近亲配婚等,导致妊娠时染色体的数目、形态、结构及结合上发生变异所引起的疾病。羊水细胞的染色体检查,对染色体疾病的产前诊断具有很大的特异性意义。

      羊水细胞培养染色体检查正常值:

      染色体总数:46条;

      常染色体:22对(序号为1-22);

      性染色体::男性为XY,女性为XX;

      男性核型:46,XY;

      女性核型:46,XX。

      羊水细胞培养染色体检查临床意义:

      染色体数量异常:如唐氏综合征(21三体综合征)、18三体综合征、13三体综合征、8三体综合征、22三体综合征、先天性睾丸发育不全综合征、XXY综合征、特纳综合征、X三体综合征和多X体综合征等。

      染色体结构异常:如4p部分单体综合征、5p部分单体综合征、9p部分三体综合征、9q部分单体综合征、21q部分单体综合征、22q部分单体综合征、22q部分三体综合征等。

    羊水细胞培养染色体检查

      羊水细胞培养染色体检查注意事项:

      1、染色体检查须于妊娠16-20周时取羊水标本;

      2、这些先天性遗传病的染色体有增多、缺乏、易位、倒置等数量和结构的异常,常表现为一种综合征。如多发性畸形、生长迟缓和智力缺陷等,多数导致胎儿流产、早产或死产。

      羊水细胞培养染色体检查检查过程:

      羊水细胞培养染色体检查的测定原理:羊水细胞是胎儿皮肤、消化道、呼吸道和经生殖泌尿系统脱落的细胞,95%左右是死细胞,因此必须经过细胞培养,使活的细胞得到充分的增殖,才能收获细胞,进行核型分析。

      试剂:①F10培养液(如用RPMI1640,M199需加1mmol/L谷氨酰胺)pH6.5~6.8。②小牛血清。③Hanks平衡盐溶液(10倍浓缩):甲液:NaCl80g,KCl4g,MgSO4·7H2O1g,MgCl2·6H2O1g,CaCl2·6H2O1.4g。将CaCl2溶于50ml三蒸水中,其它依次溶于400ml三蒸水中,两液混合,加三蒸水至500ml,加氯仿1ml混匀,保存于4℃冰箱中。乙液:Na2HPO4·12H2O1.52g,KH2PO40.6g,葡萄糖10.0g,4g/L酚磺酞液50.0ml。依次溶于三蒸水400ml中,加三蒸水至500ml,加入氯仿1ml混匀,保存于4℃冰箱。Hanks平衡工作液:甲液1份,乙液1份,双蒸水18份,混合后高压灭菌,置4℃冰箱保存。使用前以50g/LNaHCO3溶液调至适当pH。④4g/L酚磺酞液:酚磺酞0.4g置研钵中研碎,逐滴加入0.05mol/LNaOH22ml。

      直到所有颗粒几乎完全溶解,加入三蒸水至100ml,置棕色瓶中保存。⑤2.5g/L胰蛋白酶溶液:称取胰蛋白酶250mg,溶于100mlHanks溶液中,过滤除菌,或用无钙、镁离子溶液配制。⑥无钙、镁离子溶液:NaCl8.0g,KCl0.2g,枸橼酸钠1.0g,NaH2PO4·H2O0.05g,NaHCO31.0g,葡萄糖1.0g。依次溶于三蒸水中,最后加三蒸水至1000ml,过滤除菌,贮存于4℃冰箱中备用。⑦EDTA胰蛋白酶溶液:贮存液:NaCl80g,KCl4g,葡萄糖10g,NaHCO35.8g,胰蛋白酶5.0g,EDTA2.0g。依次溶于900ml三蒸水中,并加4g/L酚磺酞5ml,加三蒸水至1000ml,抽滤除菌、分装,冻存备用。工作液:取贮存液1ml,加无菌三蒸水9ml即可。⑧双抗溶液。⑨秋水仙素(10μg/ml)。

      操作方法:

      (1)取孕期16~20周羊水15~30ml,1000r/ml离心10min。

      (2)弃去多余上清液,留1ml羊水和沉淀细胞,轻轻打散成细胞悬液。

      (3)移入25ml方形培养瓶中,加pH6.5~6.8(含青霉素100U/ml,链霉素100μg/ml)的培养基3ml及小牛血清1ml,置37℃温箱中培养。

      (4)培养7~10天后可见大量成纤维样或上皮样细胞集落。此时可调换新鲜培养液。

      (5)待细胞集落扩大成片,并有许多透亮的圆形分裂细胞时,即可加入秋水仙素,使最终浓度为0.1~0.3μg/ml,置37℃温箱中再培养5~6h(上述过程均在无菌条件下进行)。收获标准:①以成纤维细胞为主要类型,成片细胞生长;②以10倍目镜和20倍物镜观察,生长的细胞克隆覆盖1个或1个以上完整视野;③见到10个以上透亮的圆形细胞和10个以上双圆形光亮的分裂细胞。

      (6)如果细胞生长不旺盛,生长周期不齐或细胞老化,未达收获标准,可在原瓶继续传代培养。方法:在无菌条件下先倒去培养液,加入2.5g/L无菌胰蛋白酶液数滴,摇动后倒去。再加入胰蛋白酶5~10滴,在37℃下轻轻摇动约5min,使贴壁细胞脱落。加入含小牛血清的新鲜培养基4ml,在37℃静置培养4~5h。再小心更换培养液,继续培养,一般传代后3~5天即可收获。

      (7)将培养液移至刻度离心管中,加ED-TA-胰蛋白酶液1ml于培养瓶内,置37℃温箱中5min,然后用弯头吸管冲洗贴壁细胞(也可用2.5g/L胰蛋白酶溶液消化)。将脱离瓶壁的细胞倒入离心管中,与原培养液相混合,并用少量温热生理盐水冲洗培养瓶,洗下的细胞也一并倒入该离心管,以1000r/min离心10min。

      (8)吸弃上清液,加入预温37℃的0.075mol/LKCl低渗液3~5ml,置37℃10~15min。

      (9)预固定、固定及制片均与外周血细胞染色体标本的制备法相同。

      羊水细胞培养染色体检查一般费用:

      150元

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